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近来，中国科学院广州生物医药与健康研讨院研讨员唐战士与浙江大学研讨员杨兵、北京航空航天大学副教授刘超团队协作，在国家天然科学基金、国家重点研制方案等项目的支持下，开宣布一种新式氟磺酸类可富集化学交联的非天然氨基酸并在活细胞中研讨蛋白质直接相互作用。相关效果发表于《天然-通讯》。
蛋白质-蛋白质相互作用判定是蛋白质功用研讨的重要进程，在活细胞中原位判定直接相互作用蛋白关于生物医药研讨具有极端重大意义。根据附近触发反响的化学交联非天然氨基酸可以捕获弱作用力和瞬时蛋白质相互作用，已被开发用于原位判定活细胞中的蛋白质相互作用。根据质谱的交联肽段解析可进步互作蛋白判定的特异性、确认蛋白相互作用界面。但是，因为蛋白质样品和质谱数据解析进程的复杂性，对蛋白质化学交联后的交联产品进行高通量判定具有挑战性。在蛋白质样品进行质谱分析前，对交联肽段进行富集是进步判定功率的有用战略。
新式含氟磺酸基团的可富集化学交联剂eFSY研讨蛋白质相互作用时，判定交联肽段的流程图（a），交联肽段的碎裂规则（b）和交联判定软件AixUaa的开发流程（c）。研讨团队供图
该研讨中，研讨人员开发了一种根据化学基团氟磺酸的化学交联非天然氨基酸，即可富集的氟磺酸-L-酪氨酸（eFSY）。他们使用密码子扩展技能能在蛋白质中特定方位刺进具有潜在生物反响性的非天然氨基酸eFSY，eFSY中氟磺酸经过根据附近触发反响诱导的硫-氟交流点击反响与相互作用蛋白中的酪氨酸、组氨酸或赖氨酸产生共价交联。eFSY带着的炔基基团可以终究靠铜催化叠氮化物-炔环加成点击化学反响链接生物素，随后就能完成交联肽段的富集，然后进步判定交联肽段的功率。此外，该研讨之后发现氟磺酸基团介导的交联产品在质谱中的混合性碎裂规则，其与组氨酸及赖氨酸交联产生的磺酸酰胺键会在质谱中产生开裂，与酪氨酸交联后构成的磺酸酰胺键却不会开裂。
为更好地使用该规则，该研讨进一步开发了交联判定软件AixUaa。AixUaa可一起兼容并区别碎裂与不行碎裂两种形式，完成了交联肽段及位点的准确匹配，进步了交联肽段的判定数量。使用此流程，研讨人员分别在大肠杆菌及哺乳动物活细胞中体系性地判定了硫氧还蛋白1和硒蛋白M的直接相互作用蛋白组，验证了该办法的有用性。
该研讨开发的根据氟磺酸基团的可富集化学交联非天然氨基酸eFSY及交联判定软件AixUaa显着进步了在活细胞中判定直接相互作用蛋白中化学交联肽段的功率，克服了以往化学交联剂在判定蛋白质相互作用蛋白组的一些缺乏，有望使用于更广泛的蛋白质相互作用研讨。
